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管装培养基的实验室制备方法
点击次数:31 发布时间:2019-09-26
     正确制备培养基时微生物检验的基础步骤之一。使用脱水培养基和其他成分,尤其是含有有毒物质(如胆盐或其他选择剂)的成分时,管装培养基应遵守良好实验室规范和生产厂商提供的使用说明。培养基的不正确制备会导致培养基出现质量问题。
 
    管装培养基使用商品化脱水合成培养基制备培养基时,应严格按照厂商提供的使用说明配置。记录所有相关数据,如质量/体积、pH、制备日期、灭菌条件和制备人员等。
 
    管装培养基使用各别成分制备培养基时,应按照配方准确配制,记录所有细节信息,如;培养基名称和类型及试剂级别、每个成分物质含量、制造商、批号、pH、培养基体积(分装体积)、无菌措施(包括实施的方式、温度及时间)、配置日期、人员等,以便潮源。
 
    1.水
 
    除特定要求,实验室用水的电导率在25℃下应不高于25uS/cm(相当于电阻率≥0.4MΩcm)。
 
    微生物污染应不超过103CFU/mL,低于102CFU/mL。应根GB/T 5750.12或其他有效方法,定期检验微生物的污染。
 
    2.称量和复水
 
    管装培养基称量所需量的脱水培养基(注意防止吸入粉末,尤其是含有有害物质的培养基粉末),先加入少量水,充分混合(注意避免培养基结块)后再加水至所需的量。
 
    3.溶解和分装
 
    脱水培养基加水后适当加热,并不搅拌使其快速溶解,必要时,重新溶解。含琼脂的培养基在加热溶解前应浸泡几分钟。
 
    4.pH的测定和调整
 
    用pH计测定pH,必要时在灭菌前调节pH,除特殊说明外,培养基灭菌后冷却至25℃时,要求pH的变化不超过0.2pH单位。通常使用浓度约为40g/L( 约1 mol/ L)的氢氧化钠溶液或浓度约为36.5g/L(约1mol/L)的盐酸溶液调节pH。如果灭菌后调节pH,溶液需灭菌。
 
    注:商品化培养基在高压灭菌前后pH可能发生明显变化,但使用蒸馏水或去离子水时,灭菌前无需调节pH。
 
    5.分装
 
    将配置好的培养基分装到适当的容器中,容器的体积至少为体积的1.2倍。
 
    6.灭菌
 
    ①概述
 
    管装培养基和试剂的灭菌通常采用湿热灭菌或过滤灭菌。
 
    有些培养基无需高压灭菌,可煮灭菌。如,含亮绿的肠道菌培养基对光和热特别敏感,应在煮沸后快速冷却,避光保存。同样,一些试剂则不需要灭菌,直接使用(参见相关标准或生产厂商的使用说明)。
 
    ②湿热灭菌
 
    湿热灭菌在高压锅或培养基制备器中进行。高压霉菌一般采用121℃±3℃霉菌15min。如果培养基的体积超过1000mL,要对灭菌条件进行适当的调整。所有操作均要按照标准和使用说明的规定进行。
 
    注:大容量培养基(>1000mL)灭菌时可能会造成过度加热。
 
    加热后应采取适当的方式冷却,防止沸溢。这对大容量培养基和敏感性培养基(如含亮绿的培养基)是非常重要的。
 
    ③过滤灭菌
 
    过滤灭菌可以在真空负压或正压条件下进行。使用无菌设备和0.2um孔径的滤膜。将过滤装置的各个部分消毒灭菌,或使用预消毒设备。
 
    一些滤膜上附着蛋白质或其他物质。为达到有效过滤,应事先将滤膜用无菌水润湿。
 
    ④监测
 
    应对经湿热或过滤灭菌的培养基进行监测,尤其要对pH、色泽、灭菌效果和均匀度等指标进行监测。
 
    7.添加剂的制备
 
    制备含有有毒物质(特别是抗生素)时应小心操作,避免因粉末的扩散造成实验人员过敏或发生其他不良反应。采用适当的预防措施并小心按照产品使用说明操作。不要使用过期的试剂;抗生素工作溶液现配现用;批量配置的抗生素溶液分装后向冷冻保存,但解冻后的贮存溶液不可再次冷冻;厂商应提供冷冻对抗生素活性影响的相关资料,也可由使用者自行测定。
 

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