三分pk拾

产品搜索
产品目录
联系方式
公司:铭修(上海)生物科技有限公司
联系人:周小姐
电话:86-021-55825868
传真:86-021-55825868
手机:18930233920
邮编:
邮箱:1006454826@qq.com
地址:上海市杨浦区武宁路269号
技术文章
当前位置:三分pk拾 > 技术文章 > 小鼠核酸氧化8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)ELISA分析试剂盒
小鼠核酸氧化8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)ELISA分析试剂盒
点击次数:118 发布时间:2019-08-14

 小鼠核酸氧化8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)ELISA分析试剂盒产品说明书

(中文版)

 

主要用途

 

 小鼠核酸氧化8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)ELISA分析试剂是一种旨在使用单克隆抗8-羟基脱氧鸟苷抗体竞争性结合样品中的8-羟基脱氧鸟苷,进而使用辣根过氧化酶缀合二抗,由生色染料四甲基联苯胺参与反应,呈现黄色产物,即通过酶联免疫吸附反应(ELISA)比色法定量评价DNA损伤水平的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。主要适用于各种小鼠细胞和组织裂解产物,以及体液样品8-羟基脱氧鸟苷的定量分析。广泛用于细胞衰老、细胞凋亡、肿瘤等的研究。产品即到即用,反应敏感,操作简捷,性能稳定,显色清晰。

 

技术背景

 

核酸氧化损伤(nucleotide oxidative damage),包括DNA和RNA损伤,是由于环境因子或细胞代谢影响,在逃避细胞防御机制的前提下,所产生的四种损伤之一:氧化、烷化(alkylation)、水解和碱基错配损伤等。而氧化损伤主要通过活性氧族(reactive oxygen species;ROS),包括超氧自由基阴离子superoxide radicalO2-)、过氧化氢(hydrogen peroxide;H2O2)、羟自由基或氢氧基(hydroxyl radical;OH-)、过氧peroxyl radical;ROO-)、氢过氧自由基hydroperoxylHOO)、烷氧自由基(alcoxyl radical)、氮氧基(nitric OxideNO-过氧亚硝基阴离子peroxynitrite anionONOO-)等的作用,使碱基羟基化和嘌呤环裂开,诱导鸟嘌呤(guanine;G)向胸腺嘧啶(thymine;T)的颠换(transversion),造成体细胞基因突变,影响细胞周期、基因转录、细胞凋亡等,最终导致各种疾病的发生,例如糖尿病、高血压、中风、癌症、衰老等。其中核酸损伤产物8-羟基脱氧鸟苷(8-hydroxy-2-deoxyguanosine;8-OHdG)作为DNA损伤的分子标志;8-羟基鸟苷(8-hydroxyguanosine)作为RNA损伤的分子标志。8-羟基脱氧鸟苷是最常见的DNA损伤产物,也是氧化应急的生物标志。通过使用酶联免疫吸附反应(enzyme-linked immunosorbent assay;ELISA),即基于单克隆抗8-羟基脱氧鸟苷抗体竞争性结合样品中的8-羟基脱氧鸟苷,进而使用辣根过氧化酶缀合二抗,由生色染料四甲基联苯胺(3,3’,5,5’-tetramethylbenzidine,TMB)参与反应,呈现黄色产物,在分光光度仪下(450nm波长),定量检测8-羟基脱氧鸟苷的含量。

 

产品内容

 

 标记液(Reagent A)         

 酶促液(Reagent B)    毫升

 清理液(Reagent C)    毫升

 底物A(Reagent D)    毫升

 底物B(Reagent E)    毫

 终止液(Reagent F)    

 标准液(Reagent G)    毫升

 抗体酶标板 96孔

产品说明书 1份

 

 

保存方式

 

保存在4冰箱里;暂时不用,保存在-20箱里; 底物B(Reagent E)易挥发,密闭瓶盖,避免光照; 抗体酶标板,密封干燥保存;有效保证6月

 

用户自备

 

1.5毫升离心管:用于工作液配制

培养箱:用于反应孵育

酶标仪:用于比色分析

 

实验步骤

 

实验开始前,将-20℃或4冰箱里试剂盒中的试剂置于室温下30分钟均衡温度。然后进行下列操作:

  • 标准样品管浓度表:

 标准液(Reagent G

 标准8-羟基鸟苷浓度

G1

xx克/毫升

G2

xx克/毫升

G3

xx克/毫升

G4

xx克/毫升

G5

xx克/毫升

G6

0

 

  • 标准样品和待测样品测定
  • 准备1个 抗体酶标板:标记好空白对照、标准样品、待测样品
  • 加入50微升用户自备的无离子水到空白对照孔里
  • 分别加入xx微升 标准液G1至G6到对应的标准样品孔里
  • 加入50微升待测样品到待测样品孔里
  • 加入xx微升 标记液(Reagent A)到待测样品孔里
  • 分别加入xx微升 酶促液(Reagent B)到标准样品和待测样品孔里
  • 摇动酶标板,充分混匀
  • 密封酶标板
  • 进37培养箱里孵育60分钟(注意:培养箱保持湿润,避免干化)
  • 小心抽去上清液
  • 加入xx微升 清理液(Reagent C)
  • 室温下孵育10秒
  • 小心抽去清理液(注意:确保没有液体残留)
  • 重复实验步骤11至13四次
  • 准备1个1。5毫升离心管
  • 分别加入等量的 底物液A(Reagent D) 底物液B(Reagent E),混匀
  • 加入xx微升上述配制的 底物工作液到标准样品和待测样品孔里
  • 室温下孵育15分钟,避免光照(注意:可见蓝色沉淀
  • 加入xx微升 终止液(Reagent F),混匀(注意:可见蓝色变成黄色
  • 即刻放进酶标仪测读:450nm波长(注意:不宜超过30分钟)
  • 构建8羟基脱氧鸟苷标准曲线:纵座标(Y轴)为吸光值(OD);横坐标(X轴)为8-羟基脱氧鸟苷浓度(纳克/毫升)
  • 根据标准曲线获得样品对应8-羟基脱氧鸟苷浓度纳摩尔/毫升)

 

注意事项

 

  • 本产品为96次操作量
  • 本产品检测敏感度达0.01纳克/毫升
  • 操作时,须戴手套
  •  抗体酶标板可以拆卸,用户根据实际需求,选择需要的孔板
  • 系统操作时,标准样品测定只需一次
  • 孵育时,须避免光照
  • 加样时确保加入孔底,避免溅出和气泡
  • 注意加样时,避免交叉污染,避免污染母液
  • 建议使用湿度充分的培养箱
  • 用户根据实际用量,配制 底物工作液;须新鲜配制,即刻使用
  • 建议染色完成后,即刻进行比色分析
  • 本公司提供系列核酸损伤检测试剂产品

 

质量标准

 

  • 本产品经鉴定性能稳定
  • 本产品经鉴定检测敏感

 

 

 

推荐收藏该企业网站
北京赛车pk10评测 北京赛车pk10杀号 欢乐棋牌 欢乐棋牌官网 甘肃快3走势图 欢乐棋牌 欢乐棋牌 北京赛车pk10后二 欢乐棋牌 欢乐棋牌